Conas a Úsáidtear Téitheoirí PTFE i Sintéis Peptide agus Táirgeadh Oligonucleotide?

Críochnaíonn timthriallta sintéise peptide agus oligonucleotide le céim scoilteachta a scarann ​​an toradh ón roisín trí aigéad trifluaraicéiteach (TFA) nó aigéid láidre eile. Chun scoilteacht éifeachtach a dhéanamh, ní mór an meascán creimneach seo a théamh agus teastaíonn téitheoir uaidh seo atá in ann an t-aigéad a sheasamh agus nach n-éilíonn an toradh ardluacha. Maidir le peptídí teiripeacha agus oligonucleotides sintéiseacha, tá na héilimh íonachta thar a bheith ard agus déantar gné shuntasach den phróiseas le roghnú an trealaimh teasa.

Céim Scoilteadh agus Díchosanta i Sintéis Chéim Soladach
Cuirtear an sprioc-mhóilín le chéile ar thacaíocht roisín dothuaslagtha trí shintéis peptíde soladach-chéim (SPPS) agus sintéis oligonucleotide soladach-chéim. Cuirtear an seicheamh iomlán le chéile agus ansin ní mór an toradh a scoilteadh ón roisín. Ag an am céanna, baintear grúpaí cosanta taobhshlabhra (le haghaidh peiptídí) nó grúpaí cosanta lipéad bonn/aigéad (le haghaidh oligonucleotides).

Is é an gnáth-mhanglaim scoilteachta do shintéis peptíde aigéad trifluoroacetic (TFA) mar phríomhghníomhaire scoilteachta, go minic i gcomhcheangal le scavengers mar triisopropylsilane (TIS), uisce nó 1,2-ethanedithiol (EDT). Maidir le sintéis oligonucleotide, is féidir díchosaint a dhéanamh trí úsáid a bhaint as amóinia uiscí tiubhaithe nó, i roinnt teicníochtaí éadroma, le réitigh ina bhfuil TFA.

go minic, tá an próiseas scoilteachta a dhéantar ag teocht méadaithe, go minic idir 30 céim agus 60 céim , d'fhonn a áirithiú scaoileadh iomlán an táirge laistigh d'am inghlactha (1-4 uair an chloig). Glantachán agus díchosaint luasanna teochta níos airde, ach ardaíonn siad freisin an fhéidearthacht go dtiocfaidh meath ar an táirge mura rialaítear go maith é. Caithfidh an téamh a bheith aonchineálach, in-atáirgthe agus saor ó aon ábhar salaithe.

TFA-A bhfuil Réitigh iontu – An Dúshlán Creimneach
Is aigéad orgánach cumhachtach é aigéad trifluara-aicéiteach (pKa ~ 0.23) atá in ann miotail iomadúla a thuaslagadh agus damáiste a dhéanamh do pholaiméirí innealtóireachta tipiciúla. Tá gal TFA an-chreimneach freisin ag teocht ard. Is féidir le téitheoirí tumoideachais miotail (tíotáiniam, cruach dhosmálta 316L, nó Hastelloy) pitting, creimeadh intergranular, nó garbhú dromchla a fhorbairt tar éis nochtadh do TFA te thar roinnt timthriallta scoilteachta.

Is féidir le creimeadh iain miotail (iarann, cróimiam, nicil, tíotáiniam, etc.) a thabhairt isteach sa réiteach scoilteachta. Is féidir leis na hiain mhiotail seo coimpléisc a dhéanamh leis an táirge peptide nó oligonucleotide, agus mar thoradh air sin:

Laghdú san íonacht arna thomhas ag HPLC nó LC-MS

Gníomhaíocht bhitheolaíoch nach féidir a thuar

Éilliú miotail atá deacair a dhíchur sa táirge deiridh lyophilised

Ina theannta sin, is féidir le hiain miotail taobhphróisis a chatalú mar ocsaídiú meitiainín nó iarmhair tryptophan i peptídí, nó dípurúchán in oligonucleotides . Ní cheadaítear éilliú den sórt sin do shubstaintí cógaisíochta GMP Grád.

Conas a Réitíonn Téitheoirí PTFE an Fhadhb Téimh Scoilte
Sonraítear tum-théitheoirí polytetrafluoroethylene (PTFE) don iarratas éilitheach seo, toisc go bhfuil PTFE go hiomlán resistant d'aigéad trifluoroacetic fiú ag teochtaí ardaithe. Ní bhíonn aon ionsaí ceimiceach, at nó díghrádú dromchla mar thoradh ar na céadta timthriall scoilteachta. Tairgeann dearadh oligonucleotide sintéise peptíde téitheoir PTFE foinse teasa glan, támh go díreach san árthach scoilteachta nó i dtaiscumar téimh le haghaidh manglam TFA.

Frithsheasmhacht iomlán in aghaidh TFA agus Scavengers
Tá PTFE cobhsaí do TFA, TIS, EDT, feanól, thioanisole agus comhpháirteanna cocktail scoilteachta caighdeánach eile. Breathnaítear an táimhe ceimiceach céanna freisin maidir le gníomhairí díchosanta oligonucleotide, mar amóinia tiubhaithe nó meitiolaimín. Is féidir tumthéitheoir déanta as PTFE a thumadh go díreach isteach sa tuaslagán scoilteachta gan aon chreimeadh ná láisteadh iain.

Neamh{0}}Gta Dromchla, Gan Iarmhair a Thógáil-Suas
Tá dromchla mín, neamhghreamaithe PTFE frithsheasmhach in aghaidh charnadh iarmhair peiptíde nó oligonucleotide, blúirí roisín scoilte, nó scavenger ó-táirgí. Tá sé éasca ábhar greamaitheach a shruthlú le tuaslagóirí cosúil le déchlóraimeatán, aicéatóintríle nó uisce. Ligeann sé seo glanadh níos éasca, seachnaíonn sé tras-éilliú na mbaisceanna sintéise éagsúla, agus simplíonn sé bailíochtú do tháirgeadh GMP.

Rialú Teochta Cruinn don Uastáirgeacht
Tá téitheoir tumoideachais PTFE nasctha de ghnáth le rialtóir PID agus braiteoir teochta (PT100 nó teirmeachúpla) dteagmháil go díreach leis an réiteach scoilteachta. Ceadaíonn mais theirmeach íseal an truaill PTFE imoibriú tapa ar athruithe socraithe pointe. Is féidir le próifíl téimh scoilteachta tipiciúil a bheith:

Rampa ó thimpeallacht go 40 céim (os cionn 10 nóiméad)

Coinnigh ag 40 céim ± 0.5 céim ar feadh 90 nóiméad

ansin fuaraithe go 25 céim agus deascadh agus scagadh an táirge

Ráthaíonn an rialú beacht seo uastáirgeacht an táirge agus, ag an am céanna, cuireann sé cosc ​​ar fhrithghníomhartha taobh cosúil le táirgeadh aspairtimíde i peptídí nó scoilteacht bannaí fosfadiester in oligonucleotides.

Nóta Iarratais: Méid Téitheoir PTFE le haghaidh Toirteanna Scoilteachta Coiteann
Nóta Iarratais: Maidir le sintéis peiptíde ar an scála saotharlainne (ualach roisín 0.1 go 10 mmol), is gnách go mbíonn na cainníochtaí scoilteachta idir 5 mL agus 500 mL. Is oiriúnach é tumthéitheoir de thógáil PTFE, 50 go 200 W. Ba cheart dlús vata an téitheoir a choinneáil íseal (Níos lú ná nó cothrom le 10 W/cm ^ 2) chun fiuchphointe TFA a chosc go háitiúil (fiuchphointe ~72 céim ). Is féidir go leor téitheoirí PTFE nó téitheoir amháin níos mó (500-3000 W) a sholáthar do shintéiseoirí uathoibrithe nó d’imoibreoirí scála píolótach (1-méid scoilteachta 50 L). Ba cheart céimseata an téitheoir (díreach, L-chruthach nó corna) a roghnú le luí isteach ar an soitheach scoilteachta gan cur isteach ar chorraí maighnéadach nó corraithe lasnairde.

I sintéiseoirí uathoibrithe áirítear téitheoirí PTFE sa mhodúl scoilteachta mar réamhthéitheoir don sruth imoibrí TFA. Rithtear an t-aigéad trí PTFE bídeach i-línethéitheoir sula sroicheann sé an soitheach imoibriúcháin. Cinntíonn sé seo go bhfuil an cocktail scoilteachta ag an teocht sprice láithreach nuair a bhuaileann sé an roisín.

Tá íonacht an Táirge Deiridh ag brath ar Éilliú-Téamh Saor in Aisce
Ní mór na codanna go léir a dteagmháil leis an réiteach scoilteachta a bheith íon chun an toradh deiridh a choinneáil íon. Ráthaíonn córas oligonucleotide sintéise peptide téitheoir PTFE nach dtugtar aon iain miotail, insleachta nó cáithníní isteach le linn an phróisis díchosanta agus scoilteachta riachtanach. Tá sé seo ríthábhachtach go háirithe maidir le peiptídí teiripeacha agus oligonucleotides atá beartaithe lena n-úsáid ag an duine, a bhfuil pharmacopoeias (m.sh., USP).<232>, ICH Q3D) tairseacha arda a shocrú le haghaidh neamhíonachtaí eiliminteacha.

Conclúid: Ard-Déantúsaíocht Bhithchógaisíochta a Cheannaireacht
Is comhpháirt chumasúcháin ríthábhachtach iad téitheoirí PTFE don chéim dheireanach, ríthábhachtach i dtáirgeadh peptide agus oligonucleotide, ag cinntiú toradh agus íonacht. Soláthraíonn na téitheoirí foinse teasa atá támh go ceimiceach, neamh-thruaillitheach, agus atá inchoigeartaithe go beacht i láthair TFA te agus oibreáin scoilteachta ionsaitheach eile, rud a chuireann ar chumas an cheimiceora shintéiseach na coinníollacha scoilteachta a bharrfheabhsú gan cáilíocht an toraidh a íobairt.

Tá réitigh téimh arda-íonachta de dhíth ar dhéantúsaíocht bhithchógaisíochta chun cinn. Cothóidh an t-éileamh méadaitheach ar pheptídí sintéiseacha (m.sh., agonists GLP-1) agus oligonucleotides teiripeacha (m.sh., drugaí antisense agus siRNA) úsáid téitheoirí tumoideachais PTFE le haghaidh céimeanna scoilteachta agus díchosanta mar chleachtas coiteann i suíomhanna taighde agus táirgeachta GMP.